国产精品亚洲色婷婷99久久精品,两个8丫头稚嫩紧窄,成人男女av片在线观看,亚洲 自拍 精品 在线 主播

免費咨詢熱線:
技術文章
首頁 > 技術中心 > 脂質體轉染的原理與方法

脂質體轉染的原理與方法

 更新時間:2024-05-17 點擊量:275
  脂質體作為體內和體外輸送載體的工具,已經(jīng)研究的十分廣泛,中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過內吞被導入細胞。下面讓我們一起來看看脂質體轉染的原理與方法吧!
  脂質體轉染操作步驟
  進行實驗之前,請先規(guī)劃好實驗,一般細胞轉染需要24h-72h,所以要充分了解細胞生長速度,計算所需脂質體和DNA的儲備量,并確認準備好所需試劑:Opti-MEM無血清培養(yǎng)基,Lipofectamine轉染試劑,以及DNA。
  1、細胞鋪板
 ?。?)一般會選擇復蘇細胞傳代3-4次,從解凍過程中恢復過來可以穩(wěn)定生長的細胞進行細胞轉染,傳代次數(shù)高(>30-40)時,細胞的生長速度和形態(tài)會改變。
 ?。?)如果提總蛋白,一般選擇六孔板進行轉染,因為轉染的細胞提取蛋白的總量能達到200ug,一般夠做并且需要的DNA和Lipofectamine又相對比較少。
  (3)傳代條件取決于所用的細胞系。對于快速生長的細胞,倍增時間為16小時(如HEK293)。對于生長緩慢的細胞,倍增時間為36小時(如原代細胞)。
 ?。?)轉染當天,將細胞鋪板。如果在轉染前一天或更早時間鋪板,轉染效率可能下降,如果是簡單細胞系的轉染,可以直接在前一天晚上鋪板,第二天來轉染。轉染時,細胞密度會影響轉染效率,細胞密度保持在匯合率為70-90%(這個前提是轉染24h,如果轉染48h則需要匯合率為50-70%),細胞的鋪板和轉染也可同時進行。
  2、細胞轉染
  吸去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。更換無血清培養(yǎng)基。準備轉染制備液,用滅菌后的EP管制備。以六孔板為例,A液:用200μl Opti-MEM稀釋4μg質粒;B液:用200μl Opti-MEM稀釋10μl lipo2000,分別將A液、B液輕輕混勻,靜置5min,吸取B液加入至A液中,輕輕混勻,室溫靜置20min。加入轉染試劑到每個孔的培養(yǎng)基中,6h后,更換成完q培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)到24-48小時(不同的質粒和脂質體最佳搭配比例不同,轉染前,應該摸一個最佳配比。質粒:脂質體=1:1,1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:3.5的梯度比例來檢測最佳轉染比例,一般質粒有帶熒光,可以通過觀察每組熒光強弱來判斷轉染效率)。以下為不同規(guī)格的培養(yǎng)板需要加DNA和lipo2000的量。
  更多有關脂質體轉染的原理與方法,請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司!
中文无码精品A∨在线观看不卡| 久久五月色婷婷丁香六月综优物| 色老头在线一区二区三区| 久久人妻少妇嫩草av蜜桃| 色欲浪潮性色AV无码视频| 欧美三日本三级少妇三级久久| 国语自产偷拍精品视频偷拍图片| 国产精品水嫩水嫩| 男人亚洲成色av网站| 宝贝把腿张开我要添你下边l| 4p调教三根一起男男| 亚洲av无码一区二区三区观看| 成熟丰满妇女xxxxxxx| 极品少妇一区二区三区四区| 男朋友舌头伸进去添好爽视频| 做床的全部过程视频| 农民工嫖妓真实过程| 一本一道色欲综合网中文字幕| 久久久无码精品国产一区| 亚洲一区二区三区女厕偷拍| A性色生活片久久毛片牛牛| 99国产精品久久久久久久日本竹 | 欧美老妇疯狂XXXXBBBB| 国产色在线 | 日韩| AV人摸人人人澡人人超碰下载| 4399理论片午午伦夜理片 | 国产suv精品一区二区88| 国产成人精品一区二区三区影院| 香蕉久久夜色精品国产| 四川少妇大战4黑人| 护士喂我乳我脱她内裤| 丰满少妇三级全黄| 女教师被内谢流白浆| 99热最新成人国产精品| 97精品国产一区二区三区| 大杂乱小说目录阅读| 亚洲精品国产suv一区88| 久久艳务乳肉豪妇荡乳A片| 女友去乡下玩被三个老头调教| 销魂美女图库| 亚无码乱人伦一区二区|