Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用于檢測懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡試劑盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒的檢測原理與注意事項(xiàng)嗎？讓我們一起來看看吧！

一、檢測原理

    Annexin V 是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生 凋亡時(shí)，膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被熒光染料 FITC 標(biāo)記的 Annexin V 結(jié)合，可 通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。

    由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可與雙鏈 DNA 特異 性結(jié)合并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光，與 Annexin V 搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。 本試劑盒檢測喜樹堿誘導(dǎo)的 Jurkat 細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：

Jurkat細(xì)胞用5 μM 喜樹堿（Camptothecin）(左) 或未加藥 (右) 處理 4 h，本試劑盒染色后流式檢測。Annexin V-FITC單陽細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞，Annexin V-FITC和PI雙陽細(xì)胞為壞死或 晚期凋亡細(xì)胞，PI 單陽細(xì)胞為裸核細(xì)胞。

二、注意事項(xiàng)

1. 檢測貼壁細(xì)胞時(shí)，需收集誘導(dǎo)凋亡后產(chǎn)生的懸浮細(xì)胞，并與后續(xù)收集的貼壁細(xì)胞一起檢測。

2. 應(yīng)盡量避免消化貼壁細(xì)胞帶來的機(jī)械損傷。同時(shí)，胰酶的消化液中應(yīng)盡量不含EDTA，因?yàn)镋DTA會(huì)影響Annexin V與磷脂酰絲氨酸的結(jié)合。

3. 如果使用含EDTA 的胰酶，收集細(xì)胞后應(yīng)充分清洗，確保 EDTA 被去除干凈。

4. 染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。

5. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。

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